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常見(jiàn)腫瘤基因檢測(cè)規(guī)范及進(jìn)展:肺癌EGFR

2013-12-26 11:09 閱讀:8705 來(lái)源:醫(yī)脈通 責(zé)任編輯:李思杰
[導(dǎo)讀] 目前,吉非替尼和厄洛替尼等小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI)已被證明是治療晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的有效靶向藥物,并只對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因敏感突變類(lèi)型的肺癌患者才顯示很好療效

    目前,吉非替尼和厄洛替尼等小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI)已被證明是治療晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的有效靶向藥物,并只對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因敏感突變類(lèi)型的肺癌患者才顯示很好療效,肺癌患者在應(yīng)用EGFR-TKI靶向治療前進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè)具有重要臨床意義,而檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性也將直接影響患者靶向治療選擇和療效。本文就肺癌EGFR基因突變的分子病理學(xué)檢測(cè)中主要的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證要點(diǎn)進(jìn)行介紹。
 


    1、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室及人員要求

    常規(guī)EGFR突變檢測(cè)方法基于基因擴(kuò)增技術(shù)之上,其檢測(cè)應(yīng)嚴(yán)格在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)室包括試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)等4個(gè)區(qū)。因肺癌EGFR檢測(cè)的標(biāo)本多為石蠟包埋的組織蠟塊,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置***的標(biāo)本制備預(yù)處理區(qū)(切片區(qū)),嚴(yán)防標(biāo)本在制片過(guò)程中被污染。各工作分區(qū)應(yīng)標(biāo)識(shí)清晰,儀器設(shè)備應(yīng)滿足檢測(cè)要求,各工作區(qū)專(zhuān)用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等不可混用。檢測(cè)過(guò)程中嚴(yán)格質(zhì)量控制,實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。

    分子病理學(xué)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加我國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)指定的機(jī)構(gòu)舉辦的技術(shù)培訓(xùn)后取得合格證,并定期進(jìn)行培訓(xùn)。

    2、EGFR突變檢測(cè)的標(biāo)本要求

    需要進(jìn)行EGFR-TKI靶向治療的患者應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變篩選;臨床標(biāo)準(zhǔn)(女性,無(wú)吸煙史等)不能決定是否進(jìn)行檢測(cè);有研究表明,免疫組織化學(xué)染色(IHC)檢出總EGFR蛋白表達(dá)也不推薦TKI治療篩選。

    EGFR突變檢測(cè),對(duì)肺癌部分切除標(biāo)本建議用于腺癌和含腺癌成分的混合型肺癌,不考慮組織學(xué)分級(jí);對(duì)肺癌全切標(biāo)本,不建議用于無(wú)任何腺癌成分的肺癌,例如純鱗癌、純小細(xì)胞癌或IHC未顯示腺癌分化的大細(xì)胞癌;對(duì)小標(biāo)本(活檢、細(xì)胞學(xué)標(biāo)本),如果不能完全除外腺癌,可檢測(cè)組織學(xué)表現(xiàn)為鱗癌或小細(xì)胞癌的標(biāo)本檢測(cè),但應(yīng)結(jié)合臨床標(biāo)準(zhǔn)(年輕患者、無(wú)吸煙史)協(xié)助篩選;對(duì)初治患者,檢測(cè)原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶;對(duì)于多發(fā)性原發(fā)肺腺癌,可分別檢測(cè),但不必對(duì)同一腫瘤多個(gè)區(qū)域檢測(cè)。

    在確定EGFR-TKI治療的進(jìn)展期(Ⅳ期)肺癌患者,或低期別患者發(fā)生復(fù)發(fā)或進(jìn)展(原先未進(jìn)行檢測(cè))時(shí),應(yīng)行EGFR突變檢測(cè)。由于肺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高,對(duì)Ⅰ~Ⅲ期肺癌,在診斷時(shí)鼓勵(lì)患者進(jìn)行檢測(cè),以便出現(xiàn)復(fù)發(fā)時(shí)及時(shí)治療,但應(yīng)視具體情況決定。

    3、EGFR突變檢測(cè)流程

    標(biāo)本處理手術(shù)或活檢組織標(biāo)本應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)用10%中性福爾馬林固定,避免用酸性、重金屬固定液或脫鈣液等處理;活檢小標(biāo)本固定6~24小時(shí),手術(shù)切除大標(biāo)本固定8~48小時(shí);細(xì)胞學(xué)標(biāo)本可用于EGFR突變檢測(cè),細(xì)胞石蠟包埋塊優(yōu)于細(xì)胞涂片。

    標(biāo)本評(píng)估及DNA提取對(duì)檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)評(píng)估是EGFR檢測(cè)最重要的質(zhì)量控制之一,病理醫(yī)生首先應(yīng)評(píng)估整個(gè)樣本中腫瘤細(xì)胞含量(腫瘤細(xì)胞百分比),確定標(biāo)本是否滿足檢測(cè)要求(所采用檢測(cè)方法的敏感性),必要時(shí)進(jìn)行微切割富集腫瘤,EGFR突變檢測(cè)標(biāo)本使用的切片機(jī)刀架座須清潔并消毒,不同標(biāo)本切片時(shí)要更換刀片;制備3~10張厚8μm組織切片,對(duì)照HE染色結(jié)果刮取腫瘤細(xì)胞豐富區(qū)域,避開(kāi)非腫瘤區(qū)和壞死區(qū)等;采用標(biāo)準(zhǔn)試劑盒提取基因組DNA,并測(cè)定DNA濃度。

    EGFR突變檢測(cè)EGFR突變檢測(cè)方法有很多種,應(yīng)結(jié)合檢測(cè)標(biāo)本特點(diǎn)來(lái)判斷是否進(jìn)行檢測(cè)。最傳統(tǒng)的直接測(cè)序法(Sanger測(cè)序)可得到序列的直接信息,對(duì)未知突變的檢出具有優(yōu)勢(shì),是直接有效地檢測(cè)基因突變狀態(tài)的方法,但敏感性較低,實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間長(zhǎng)、步驟復(fù)雜、易污染。

    以實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)為平臺(tái)的突變檢測(cè)技術(shù),均須根據(jù)已知的突變類(lèi)型設(shè)計(jì)引物和探針,因此無(wú)法檢測(cè)出所有可能的突變,但敏感性較直接測(cè)序法高,操作簡(jiǎn)單,不必對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行操作,很大程度避免了擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。

    實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用能在至少含50%腫瘤細(xì)胞的標(biāo)本中檢測(cè)到突變的方法。推薦采用更敏感的方法,至少能在含10%腫瘤細(xì)胞的標(biāo)本中檢測(cè)到突變,但不可一味追求高敏感性,而忽視對(duì)特異性和準(zhǔn)確性的考量。

    另外,不同實(shí)驗(yàn)條件、不同樣本中檢測(cè)的最適方法也可能不同,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇適合的EGFR基因突變檢測(cè)方法,通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所采用方法的準(zhǔn)確性和敏感性,無(wú)論采用何種檢測(cè)方法,臨床EGFR基因突變檢測(cè)應(yīng)能檢測(cè)所有突變頻率在1%以上的突變類(lèi)型。

    EGFR突變檢測(cè)結(jié)果分析與報(bào)告EGFR突變檢測(cè)根據(jù)各自檢測(cè)方法的判讀標(biāo)準(zhǔn)分析檢測(cè)結(jié)果。測(cè)序法檢測(cè)EGFR基因突變,成功的峰形圖的峰形規(guī)則,如圖1,RT-PCR法檢測(cè)EGFR基因突變結(jié)果如圖2所示;如果檢測(cè)結(jié)果可疑(圖3,4),應(yīng)重復(fù)進(jìn)行檢測(cè)或采用其他的檢測(cè)方法驗(yàn)證。


 

 

 


    EGFR突變檢測(cè)報(bào)告須包括結(jié)果和說(shuō)明,報(bào)告內(nèi)容應(yīng)讓腫瘤醫(yī)生和其他病理醫(yī)生易于理解,檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后2周(10個(gè)工作日)內(nèi)簽發(fā)報(bào)告,平均檢測(cè)周期>2周的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有措施(自身或第3方實(shí)驗(yàn)室)來(lái)保證緊急病例能更快得到檢測(cè)結(jié)果。

    4、EGFR突變檢測(cè)的其他質(zhì)量控制與質(zhì)量保證

    分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)嚴(yán)格按照已經(jīng)驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程進(jìn)行EGFR檢測(cè),EGFR突變檢測(cè)驗(yàn)證應(yīng)與其他分子診斷相同,每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性和陽(yáng)性質(zhì)控,定期總結(jié)檢測(cè)結(jié)果,及時(shí)發(fā)現(xiàn)并解決問(wèn)題。

    實(shí)驗(yàn)室每月采用不同的檢測(cè)平臺(tái)驗(yàn)證一定數(shù)量的EGFR基因突變檢測(cè)結(jié)果,每年應(yīng)至少參加兩次單項(xiàng)能力驗(yàn)證(室間質(zhì)控)。

    驗(yàn)證機(jī)構(gòu)有我國(guó)衛(wèi)生計(jì)生委病理質(zhì)控中心(PQCC),國(guó)際機(jī)構(gòu)如美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)(CAP),歐洲分子基因診斷質(zhì)量聯(lián)盟(EMQN)等。

    2013年肺癌相關(guān)研究:(按照時(shí)間順序)
    部分非小細(xì)胞肺癌無(wú)需行系統(tǒng)性淋巴結(jié)清掃術(shù)
    煙霧之殤 30年肺癌死亡率上升465%
    科學(xué)家發(fā)現(xiàn)肺癌生長(zhǎng)的基因缺陷的圖譜
    NICE推薦肺癌表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變?cè)\斷試劑盒
    新研究證實(shí)琥珀酸脫氫酶5調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移
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    新型血漿蛋白可更好檢出和排除肺癌
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