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同一個(gè)標(biāo)志物可用不同方法進(jìn)行檢測(cè),如可以從血清學(xué)水平、免疫組化檢測(cè)CEA或P-gp等,也可以用FCM或RT-PCR來檢測(cè)。
血清學(xué)水平:除傳統(tǒng)的放射免疫分析(RIA)和酶聯(lián)免疫分析(ELISA)外,目前在國(guó)內(nèi)主要有三類全自動(dòng)免疫化學(xué)分析系統(tǒng)(化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng);熒光免疫分析系統(tǒng)和電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng))廣泛的應(yīng)用于臨床,對(duì)血清腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)具有快速、準(zhǔn)確、半定量??蓹z測(cè)AFP、CEA、CA19-9、CA72-4、CA125、CA15-3、NSE、Cyfra21-1、PSA、f- PSA等。
組織學(xué)水平:免疫組化和原位分子雜交組化技術(shù)是近年發(fā)展起來的一門新興邊緣學(xué)科。它將免疫學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)同組織病理學(xué)制片方法巧妙結(jié)合在一起,在組織細(xì)胞原位顯示某些化學(xué)成分和特定基因片段。
常規(guī)標(biāo)本中約5%~15%疑難病例或惡性腫瘤需采用免疫組化進(jìn)行鑒別診斷和預(yù)后分析。
Porter D利用mRNA原位雜交檢測(cè)細(xì)胞水平基因表達(dá),在組織芯片上免疫組織化學(xué)檢測(cè)乳房導(dǎo)管原位癌和浸潤(rùn)癌病理學(xué)特征和臨床意義。
圖像分析技術(shù)可以定量測(cè)定組織切片上腫瘤細(xì)胞DNA含量和形態(tài)學(xué)分析,對(duì)判斷腫瘤惡性度及預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。
細(xì)胞學(xué)水平:流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)。是利用FCM對(duì)細(xì)胞和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和某些功能進(jìn)行定量檢測(cè),并利用細(xì)胞表面特異性標(biāo)志對(duì)特定細(xì)胞亞群進(jìn)行分析和分選的先進(jìn)技術(shù)方法。檢測(cè)白血病和淋巴瘤標(biāo)記物(CD系列)利于診斷和鑒別診斷;用FCM檢測(cè)惡性腫瘤細(xì)胞的P-gp可為臨床選擇化療藥物提供依據(jù);我們用FCM檢測(cè)消化道腫瘤外周血CD44水平。
電鏡:電鏡酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)、原位雜交電鏡技術(shù)。
分子學(xué)水平:聚合酶鏈反應(yīng)法(PCR)是一種極為簡(jiǎn)單、敏感、高效、特異和快速的能在體外進(jìn)行擴(kuò)增DNA的技術(shù)。
目前,國(guó)內(nèi)外用RT-PCR方法檢測(cè)外周血中的腫瘤細(xì)胞的主要標(biāo)記基因有細(xì)胞角蛋白19(CK19 mRNA)和20(CK20mRNA)用于上皮性惡性腫瘤;癌胚抗原(CEAmRNA)用于結(jié)直腸癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌等CEA分泌性腫瘤;甲胎蛋白( AFPmRNA)用于肝細(xì)胞癌微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)。
生物芯片分析系統(tǒng):①基因芯片。我們做了卵巢癌和食管癌基因表達(dá)譜的研究工作。Zhu G報(bào)道用顯微切割和芯片技術(shù)結(jié)合分析乳房癌不同部位腫瘤細(xì)胞之間基因表達(dá)差異。②組織芯片。組織芯片可以幫助節(jié)省試劑、人力和費(fèi)用。過去分析一個(gè)腫瘤的試劑量現(xiàn)在可以分析高達(dá)數(shù)百個(gè)甚至1000個(gè)腫瘤,而且是在同一張切片上同時(shí)進(jìn)行。③蛋白芯片。為多標(biāo)志聯(lián)合檢測(cè)提供了理想的工具,英國(guó)RANDOX公司已經(jīng)在全球同時(shí)推出的包含8種腫瘤標(biāo)志的蛋白芯片。
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