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拔除中心靜脈插管時應嚴格遵照無菌操作的要求,包括消毒皮膚以及此后的各個步驟,以確保微生物檢驗結果的可靠性。中心靜脈插管的許多部分均被用于診斷感染;然而,最常使用的是導管尖端及接頭部分(表26)。由于直至大量微生物定居于中心靜脈插管最遠端后大多數CRS病例才有臨床表現,最好使用導管尖端(遠端的30至50mm)進行培養(yǎng)。
定性培養(yǎng)可以提示導管上有何種菌落定居,但是不能區(qū)分單純的定居和真正的導管感染。因此,這些方法不能用于確定導管是否為造成全身性感染的明確原因。正因如此,定量培養(yǎng)才被用于上述鑒別診斷。Maki等建立了一種半定量培養(yǎng)方法,將導管遠端在標準的 Petri盤(90mm)中的凝膠表面滾動,之后進行培養(yǎng)。若培養(yǎng)結果大于或等于15cfu,則認為高度提示導管感染,若菌落計數較少,則提示單純的定居。這種簡單的技術可在所有的微生物學實驗室進行,目前已經成為比較所有新的CRS診斷方法的參照。Maki的研究首先描述了評價導管相關性感染
的有效方法,盡管所采用的分界值(15cfu)僅是人為確定的導管形狀、大小以及制造材料,患者的情況,以及拔除導管時患者可能因其它原因接受抗生素治療等,都是能夠影響上述診斷標準的因素。自從1977年提出后,由于以上因素的影響,這種技術并未成為得到廣泛采用。Clei發(fā)明了一種定量培養(yǎng)技術,將肉湯培養(yǎng)基沖洗導管腔后進行培養(yǎng),從而使導管腔外培養(yǎng)與腔內培養(yǎng)相結合。進行操作時,將待檢導管一段置于2ml肉湯培養(yǎng)基中,用注射器反復沖洗3次。然后將0.lml肉湯培養(yǎng)基按1:10和1:100稀釋,種植于血凝膠中。作者將>1000cfu/ml確定為導管感染。采用這種陽性標準診斷CRS,其敏感性為100%,特異性為95%。盡管這項技術較為復雜,但其優(yōu)點在于除腔外感染之外,還能夠發(fā)現通過腔內途徑發(fā)生的感染。理論上,Maki法僅能確定經由表皮來源,沿導管外部發(fā)生的感染,因為滾動技術只能研究導管的外表面。
Brun- Buisson等人描述了一種較為簡單的定量培養(yǎng)方法，他們將一段待檢導管置于裝有l(wèi)ml無菌蒸餾水的管中。振蕩1鐘后,取出0.1ml懸液置于血凝膠中。采用1000cfu/ml作為臨界值,這種方法對于導管相關性感染(CRI)診斷的敏感性為97.5%,特異性為88%,而對于導管相關性菌血癥(CRB)的診斷敏感性和特異性均為100%。
同時還發(fā)現,將導管浸入10ml肉湯中,超聲振蕩1分鐘,然后取出0.1ml,按照1:100稀釋后并不能顯著提高上述方法的至此已經介紹的定量培養(yǎng)方法尚無法區(qū)分導管相關性感染是腔內抑或腔外途徑造成,這是因為培養(yǎng)方法本身不能區(qū)分兩個表。1985年, Linares等人對Clei的定量培養(yǎng)方法進行了改善，從而使得上述鑒別成為可能。作者用2ml培養(yǎng)基沖洗導管的內表面,然后取出0.1ml逐步稀釋,進行定量培養(yǎng)以確定腔內定居情況。然后,按照Maki法進行導管培養(yǎng),以確定導管腔外細菌定居情況。這種方法非常耗費人力,但敏感性為100%,在CRI的病理生理學研究中尤其得到重視。采用這種方法,同一作者證實在CRI的發(fā)病過程中導管接頭受到污染的重要性。

上述診斷方法需要等待18~24小時才能得到結果?？梢詫Π纬膶Ч苓M行革氏染色或丫啶橙染色,這種快速方法能夠對感染的導管作出早期診斷。在顯微鏡下每觀察20個視野發(fā)現1個微生物,即可判定為陽性。然而,快速診斷方法需要精細的判讀,敏感性和特異性都很低。而且僅可用于薄壁的透明塑料導管。