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    幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展

    1983年澳大利亞學(xué)者M(jìn)arshall等首次從胃炎患者的胃粘膜中分離出一種螺旋彎曲桿菌（后被命名為幽門(mén)螺桿菌），引起了廣泛關(guān)注和研究。由于檢測(cè)手段的不斷進(jìn)步和發(fā)展，提高了臨率診治胃十二指腸疾病的水平，更新了人們對(duì)胃十二指腸疾病的傳統(tǒng)觀念和認(rèn)識(shí)。

    1  幽門(mén)螺桿菌的研究現(xiàn)狀

    該菌從形態(tài)學(xué)上看，在體內(nèi)呈螺旋桿狀，在體外培養(yǎng)呈彎桿狀，故被正式命名為幽門(mén)螺桿菌。1990年8月的悉尼國(guó)際胃腸會(huì)議肯定了幽門(mén)螺桿菌與慢性胃炎（CG）消化性潰瘍（PU）的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)證明，此菌的存在與病變程度有密切聯(lián)系。在一些胃十二指腸疾病中幽門(mén)螺桿菌感染率很高，檢出率為58%——100%.有人通過(guò)對(duì)胎兒、新生兒、嬰幼兒、正常人免疫學(xué)及細(xì)菌學(xué)的研究認(rèn)為，人體胃粘膜出現(xiàn)幽門(mén)螺桿菌是外源性感染方式，人與人及人與動(dòng)物之間的傳染是幽門(mén)螺桿菌的可能傳播途徑。城市人口感率高于農(nóng)村人口，澳大利亞土著人的幽門(mén)螺桿菌感染率顯著低于隨機(jī)挑選的獻(xiàn)血員。揭示密切的社會(huì)接觸有利于幽門(mén)螺桿菌感染的流行。幽門(mén)螺桿菌感染的致病機(jī)理至今尚未完全闡明。賈博琦認(rèn)為，可能是隱性感染過(guò)程，即在幽門(mén)螺桿菌浸潤(rùn)下，胃粘膜充血、水腫造成幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)的適宜環(huán)境，幽門(mén)螺桿菌借機(jī)侵入粘膜下層生長(zhǎng)繁殖，并逐漸發(fā)展為慢性炎癥或潰瘍。

    張振華等認(rèn)為，幽門(mén)螺桿菌對(duì)人感染過(guò)程分為3個(gè)階段：①幽門(mén)螺桿菌借其螺旋狀菌體及其結(jié)構(gòu)的特征，穿透粘膜表面的不溶性粘液層；②借幽門(mén)螺桿菌表面菌毛樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)與胃粘膜上皮表面相應(yīng)的受體結(jié)合，在胃壁穩(wěn)定持續(xù)地定居；③再由幽門(mén)螺桿菌的LPS或其它的細(xì)胞毒素引起胃粘膜非特異性炎癥。在此基礎(chǔ)上再加上胃酸、胃蛋白酶的作用造成炎癥或潰瘍。Morgan通過(guò)對(duì)幽門(mén)螺桿菌的流行病學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、病因?qū)W、臨床診斷學(xué)與藥物治療等方面進(jìn)行的研究證實(shí)45%的幽門(mén)螺桿菌有細(xì)胞損害作用。幽門(mén)螺桿菌含有多種生物化學(xué)損傷因子：①幽門(mén)螺桿菌含類(lèi)脂多糖脂肪酸A,它具有Gram陰性菌的內(nèi)毒素特性；②有豐富的尿素酶活性，它分解尿素成NH4+與CO2,而NH4+可破壞粘膜屏障，使跨膜電位發(fā)生改變，引起細(xì)胞通透性增加，H+逆相擴(kuò)散，產(chǎn)生糜爛和潰瘍。③幽門(mén)螺桿菌有蛋白分解酶，將高分子的粘液分解為低分解為低分子物，使粘度減低，不能阻止H+逆相擴(kuò)散。④幽門(mén)螺桿菌感染染致免疫反應(yīng)，在急性活動(dòng)期，局部出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)（中性多核為主），在慢性期，局部出現(xiàn)淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞浸潤(rùn)和SIgA及SC為主。⑤幽門(mén)螺桿菌增強(qiáng)活性氧的生成而介導(dǎo)粘膜損害。從組織學(xué)觀點(diǎn)看幽門(mén)螺桿菌感染加重了洗動(dòng)性胃炎、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、破壞腺體導(dǎo)致萎縮性胃炎。也可損害胃排空而促進(jìn)潰瘍形成?？傊拈T(mén)螺桿菌的存在及其致病性已不容置疑，關(guān)鍵在于提高對(duì)幽門(mén)螺桿菌的檢測(cè)水平，針對(duì)病因進(jìn)行有效治療并通過(guò)對(duì)幽門(mén)螺桿菌的臨測(cè)指導(dǎo)臨床治療。

    2  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展

    幽門(mén)螺桿菌的檢測(cè)方法目前已有尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)、活檢標(biāo)本切片染色、直接涂片染色、14C呼試驗(yàn)及免疫學(xué)方法等各種測(cè)定法。權(quán)衡利弊各有優(yōu)缺點(diǎn)。

    2.1  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：尿素酶試驗(yàn)

    該試驗(yàn)是所有檢測(cè)手段中最為簡(jiǎn)便迅速的一種方法，在胃鏡檢查同時(shí)進(jìn)行，敏感性和特異性分別達(dá)91%和100%時(shí)，數(shù)分鐘即可做出診斷。檢查結(jié)果與直接涂片法、分離培養(yǎng)法、組織病理學(xué)結(jié)果一致或近似?；顧z標(biāo)本的尿素酶活性主要與感染的數(shù)量多少有關(guān)，量少時(shí)可能造成假性反應(yīng)，而其它產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌也可能造成假陽(yáng)性，但仍不失為一種最初檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌感染的有效手段。

    2.2  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：細(xì)菌培養(yǎng)

    胃粘膜組織的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷幽門(mén)螺桿菌感染的最可靠方法，往往做為驗(yàn)證其它檢測(cè)手段的“金標(biāo)準(zhǔn)”.但不少因素可能會(huì)影響幽門(mén)螺桿菌的培養(yǎng)而致假陰性。如：胃粘膜組織中的幽門(mén)螺桿菌的數(shù)量過(guò)少、細(xì)菌繁殖能力差等。

    2.3  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：活檢標(biāo)本切片染色

    將胃粘膜活檢組織標(biāo)本用100%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片染色。染色的方法有很多種，主要有Warth-Starry（W-S）染色，改良Giemsa染色，Gresyefast,HE和熒光染色，其中（W-S）染色效果最好，細(xì)菌清晰易辨，特異性和敏感性幾乎均達(dá)100%.但該法繁瑣且需一定技術(shù)。此外HE染色法既可供組織學(xué)運(yùn)用又可檢查幽門(mén)螺桿菌。也可做為一種常規(guī)檢測(cè)方法。Langdale-Brown等報(bào)道用吖啶橙熒光染色，幽門(mén)螺桿菌易辨認(rèn)，且方法簡(jiǎn)單、快速，尤其在幽門(mén)螺桿菌量少時(shí)優(yōu)于W-S和Giemsa染色，不易漏診。

    2.4  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：直接涂片染色

    Pinlard用相差顯微鏡直接檢查涂于玻璃片上的胃粘膜查幽門(mén)螺桿菌，敏感性達(dá)100%.

    2.5  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：13C14C呼吸試驗(yàn)

    有人利用幽門(mén)螺桿菌產(chǎn)生的尿素酶能分解尿素的原理，將胃內(nèi)用核素標(biāo)記的尿素分解產(chǎn)生CO2和NH2,CO2被吸收后經(jīng)肺排出，如果胃粘膜有幽門(mén)螺桿菌存在，則呼出氣中就有核素標(biāo)記的CO2出現(xiàn)。檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌的敏感性和特異性分別達(dá)到100%和88%,幽門(mén)螺桿菌清除后14CO2呼出減少。Ormand等發(fā)現(xiàn)收集服用核素標(biāo)記的尿素后20min的呼氣體即可有效地檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌感染。

    2.6   幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：免疫學(xué)方法

    佐貫等采用乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)血中抗幽門(mén)螺桿菌IgG抗體，并與組織培養(yǎng)法和鏡檢法進(jìn)行對(duì)照，血中抗幽門(mén)螺桿菌抗體與粘膜內(nèi)幽門(mén)螺桿菌檢出一致率為73.1%,特異性為60%——100%,敏感度為81.3%,對(duì)幽門(mén)螺桿菌感染的篩選診斷具有一定的實(shí)用價(jià)值。Rathbone等用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定73例經(jīng)胃鏡檢查并活檢確診的患者血清幽門(mén)螺桿菌抗體，發(fā)現(xiàn)其敏感性和特異性分別達(dá)到93%和97%.Engstrand等建立了檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌的單克隆抗體方法，為診斷幽門(mén)螺桿菌感染提供了更為特異的方法。張啟波等利用初步純化的幽門(mén)螺桿菌的尿素酶為抗原對(duì)120例病人的血清抗幽門(mén)螺桿菌抗體進(jìn)行了ELISA測(cè)定，對(duì)照細(xì)菌培養(yǎng)等方法顯示敏感為95%,特異性為91%.吉林市第222醫(yī)院用血清免疫熒光方法診斷幽門(mén)螺桿菌感染，顯示很高的敏感性。浙江醫(yī)科大學(xué)用親和素一生物素（**）法檢測(cè)活檢組中的幽門(mén)螺桿菌抗原，可顯著提高診斷的靈敏性。

    2.7  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的進(jìn)展：其它

    Sehneider等報(bào)道，讓患者吞入系線膠囊以收集胃內(nèi)粘液，再通過(guò)涂片和尿素酶試驗(yàn)檢測(cè)粘液內(nèi)的幽門(mén)螺桿菌，發(fā)現(xiàn)其特異性、敏感性也很高。郎大裕等用一種添加了尿素的pH指示劑的酚紅，使幽門(mén)螺桿菌染色，通過(guò)內(nèi)鏡觀察幽門(mén)螺桿菌在人胃內(nèi)的分布情況，應(yīng)用本法的30例胃潰瘍患者中26例色素撒布后立即可以見(jiàn)到發(fā)紅現(xiàn)象。全部病例都可在發(fā)紅的部位檢出幽門(mén)螺桿菌。

    3  幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)的展望

    為克服幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)中的假陽(yáng)性結(jié)果，中山醫(yī)科大學(xué)與澳大利亞學(xué)者合作探討了血清學(xué)與尿素呼氣試驗(yàn)診斷幽門(mén)螺桿菌感染的價(jià)值，在血清學(xué)試驗(yàn)中對(duì)接近界限值的陽(yáng)性血清再增加一個(gè)空腸彎曲菌吸收試驗(yàn)，可提高血清學(xué)診斷的特異性，呼氣試驗(yàn)的敏感性為98.7%,特異性為97.1%,并能準(zhǔn)確測(cè)定幽門(mén)螺桿菌陰轉(zhuǎn)及復(fù)發(fā)或再感染，可望成為抗幽門(mén)螺桿菌治療的藥物篩選及療效監(jiān)測(cè)的重要手段。Megraud等用DNA雜交技術(shù)檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌，從理論上講其特異性好，有發(fā)展前途，但目前尚不能應(yīng)用于活檢標(biāo)本的幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)。

    綜上所述，幽門(mén)螺桿菌感染與胃十二指腸疾病的關(guān)系已證明，隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入幽門(mén)螺桿菌的檢查方法也將不斷取得突破性進(jìn)展。