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    反義技術是近年發(fā)展起來的一門治療腫瘤的新技術，已成為醫(yī)學界研究的熱點之一，許多反義藥物已開始進入臨床實驗階段，并取得了令人滿意的療效。文章主要綜述了反義核酸誘導治療白血病新進展。

    腫瘤細胞因其自身的生長特性而有一些特異表達的基因，這些基因在正常細胞不表達或表達程度很低，因而針對這些基因的反義藥物在治療腫瘤時對正常組織不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生較小的副作用。目前選擇的抗腫瘤反義藥物的靶點主要有：
    ①癌基因類：c-myc、c-myb，bcl-2，N-Ras，K-Ras，H-Ras，c-un，c-fos，cdc-2，c-mos等。
    ②宿主基因類：如多藥耐藥基因、細胞周期素、前胸腺素、T細胞受體、表皮生長因子受體、蛋白激酶C等。
    ③細胞因子類：如IL-2，IL-1α，IL-1β等。
    在白血病方面，被研究的基因主要有以下方面。

    1.癌基因類

    1.1 Bcl-2

    目前的研究已表明：bcl-2基因是一個耐藥和抗凋亡基因。bcl-2蛋白表達的高低與腫瘤細胞對多種化療藥物敏感性密切相關，bcl-2基因的過度表達可明顯降低化療藥物引起的細胞凋亡。Zhang等將三氧化二砷與bcl-2的反義寡核苷酸聯(lián)用，作用于K562和NB4細胞，結果發(fā)現(xiàn)反義寡核苷酸能明顯促進白血病細胞系對三氧化二砷的敏感性。

    Bcl-2的過表達被認為是白血病耐藥、預后差的重要原因之一，那么，降低bcl-2的表達，則可部分逆轉其耐藥，增加緩解率。根據(jù)這一設想Marcucci等利用bcl-2反義寡核苷酸藥物G3139進行了臨床實驗，病人共20例，包括難治及復發(fā)的急性淋巴細胞白血病和急性髓細胞性白血病。采用G3139與氟達拉濱、阿糖胞苷及粒細胞集落刺激因子聯(lián)合用藥，9例病人對治療有反應，其中6例取得完全緩解，3例部分緩解；在12例可評價的病人中，9例bcl-2 mRNA水平下調，此項研究證實，bcl-2反義寡核苷酸能夠在治療白血病中起到積極作用。已有研究證實，針對bcl-2 mRNA翻譯起始部位的反義寡核苷酸（AS-ODN）可抑制許多腫瘤細胞中bcl-2的表達，促進細胞凋亡，提高腫瘤細胞對化療的敏感性。

    1.2 Bcl-xL

    Bcl-x mRNA前體經(jīng)過不同的剪接可產(chǎn)生兩種不同的mRNA，表達產(chǎn)物分別為抗凋亡的Bcl-xL和促凋亡的Bcl-xS。近來的一些研究報道提出凋亡抑制蛋白Bcl-xL和許多常見惡性腫瘤的化療耐藥有密切關系。在體外轉染針對Bcl-xL基因的ASODN以后，能夠誘導多種惡性腫瘤細胞凋亡，或促進其對化療藥物的敏感性。 Broome等進行了Bcl-xL的反義寡核苷酸作用于急性T淋巴細胞性白血病細胞系CEM的研究，經(jīng)反義寡核苷酸干預18h后，與對照組相比，CEM細胞的Bcl-xL蛋白表達及活細胞計數(shù)均明顯降低，聯(lián)合應用地塞米松或阿霉素則作用效果更為明顯，結果證實Bcl-xL反義寡核苷酸具有細胞毒活性，能夠增強化療藥物誘導的白血病細胞死亡。

    1.3 c-myb

    c-myb基因屬于癌基因的一種，與細胞周期進展有關。c-myb蛋白水平隨細胞周期的進程而短暫升高。在細胞終末分化階段c-myb的表達迅速下降。c-myb的表達能阻斷正在分化的骨髓細胞成熟。Luger 等用c-myb的反義寡核苷酸對部分慢性粒細胞白血病病人在自體骨髓移植前進行骨髓凈化，提取CD34（+）骨髓細胞，用c-myb的反義寡核苷酸凈化24h（19例）或72h（5例），檢測c-myb mRNA發(fā)現(xiàn)其表達水平下降大約50%，細胞經(jīng)長期原代培養(yǎng)，檢測bcr/abl發(fā)現(xiàn)超過50%的病人取得了完全的凈化，第100d細胞遺傳學檢測發(fā)現(xiàn)，盡管自體移植前100%的病人呈Philadelphia染色體陽性，但移植后有6/14的病人有細胞遺傳學改變，其中1例獲得完全細胞遺傳學緩解，3例Philadelphia（+）病人細胞降至33%以下，與對照組相比效果明顯。

    2.凋亡抑制蛋白家族

    腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細胞的凋亡受阻密切相關，許多凋亡抑制蛋白（IAP）家族成員已成為基因治療的有效靶點。Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡抑制基因，定位于17q25上，廣泛地表達于胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類腫瘤細胞，在正常分化成熟組織中未見表達。Survivin以細胞周期依賴特異性表達于G2/M期，參與有絲分裂過程中紡錘體的形成，保持有絲分裂的真實性，從而使細胞順利通過G2/M期。研究表明Survivin基因在胚胎發(fā)育及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用。大多數(shù)白血病細胞表達Survivin基因，而正常骨髓細胞均不表達Survivin。由于Survivin在腫瘤細胞中的特異性表達，使它在理論上成為反義基因治療腫瘤的一個新靶點。Olie等針對Survivin mRNA設計6條ASODN，然后應用熒光定量PCR篩選到下調mRNA作用最強的ASODN4003。王曉娟等將Survivin基因反義核酸通過電穿孔的方法轉染入白血病細胞系HL-60，發(fā)現(xiàn)Survivin mRNA的表達下降，進一步與紫杉醇聯(lián)用發(fā)現(xiàn)Survivin反義核酸能夠增加HL-60細胞的凋亡。

    3.端粒酶

    端粒酶是由RNA和蛋白質組成的一種核糖核蛋白復合物，含有端粒重復序列的模板，能以自身RNA為模板，復制合成端粒重復序列，對維持細胞的生存起著極其重要的作用。研究表明在人體大部分正常組織中沒有端粒酶活性表達，僅在胚胎細胞、睪丸、卵巢、肝細胞、造血干細胞及正常白細胞等部分細胞中有端粒酶很弱的表達，與之相反，約有85%的腫瘤細胞表達較高的端粒酶活性。這說明端粒酶激活在大多數(shù)腫瘤細胞中普遍存在，端粒酶可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。端粒酶由三部分組成：人端粒酶催化亞單位（hTERT），人端粒RNA（hTR），端粒酶相關蛋白（TP1）。Yuan等將端粒酶HTERT反義寡核苷酸與CDDP 聯(lián)合作用于HL-60 及K562細胞，發(fā)現(xiàn)該反義寡核苷酸能增加HL-60及K562對CDDP的敏感性，誘導這兩種細胞系的凋亡。之后，他們又對急性及慢性髓細胞性白血病病人的白血病細胞進行類似實驗，結果也證實端粒酶HTERT反義寡核苷酸能夠促進白血病細胞對CDDP的敏感性。

    4.蛋白激酶C

    蛋白激酶C（PKC）是絲-蘇氨酸蛋白酶家族，參與信號傳導系統(tǒng)，調控生長因子應答，控制細胞增殖和凋亡，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。因此，PKC成為抗腫瘤治療的靶點。Thonel A等用蛋白激酶C反義核苷酸作用于AML細胞，發(fā)現(xiàn)單獨應用反義核酸對白血病細胞作用有限，但如果與化療藥物聯(lián)合應用卻能取得讓人滿意的結果。

    5.耐藥基因類

    腫瘤細胞耐藥是化療失敗的一個重要原因，各方學者都在探討逆轉腫瘤細胞耐藥的方法，這些方法多在P-gp水平起作用，且副作用較大。從基因水平逆轉其耐藥便成為研究熱點方向。多藥耐藥基因（MDR1）在腫瘤耐藥中起了重要的作用。Wei等試驗用反義技術逆轉其耐藥，他們采用耐阿霉素的K562細胞（K562/ADM）系作為研究對象，以針對MDR1的核酸肽和反義寡核苷酸作用于K562/ADM，結果發(fā)現(xiàn)，單獨的核酸肽和反義寡核苷酸對K562/ADM的增殖沒有抑制作用，而與阿霉素共同作用時則產(chǎn)生明顯的抑制作用，K562/ADM細胞內阿霉素的濃度明顯增高，P-gp表達下調。

    6.血管內皮生長因子

    血管內皮生長因子（VEGF）是一種促血管形成因子，在體外能夠誘導血管內皮細胞的增殖和遷移，在體內能夠促進血管新生。血液系統(tǒng)腫瘤也存在血管新生現(xiàn)象，瘤細胞過量表達VEGF，骨髓微血管密度增加。研究顯示VEGF能促進白血病的發(fā)生發(fā)展，還與預后有關。因此抑制VEGF表達可能成為血液腫瘤治療的一項新措施。Ruan等分別將VEGF正義核苷酸與反義核苷酸轉染入白血病細胞系K562，檢測細胞的增殖與凋亡，結果發(fā)現(xiàn)轉染反義核苷酸的K562細胞VEGF分泌下降49%，而轉染正義核苷酸的K562細胞VEGF分泌上升3倍；他們還進一步進行了動物實驗，將轉染反義核苷酸的K562細胞接種至裸鼠，結果腫瘤微血管密度較對照組減低，而且如果在INFα存在的情況下細胞凋亡加速。

    7.細胞周期類

    細胞周期素（cyclins）是特定時相短暫出現(xiàn)的基因表達產(chǎn)物，是細胞周期素依賴性激酶（CDK）的基本激活亞基，對細胞通過細胞周期調控點（cell-cycle checkpoints）的調節(jié)上起關鍵性作用。目前已發(fā)現(xiàn)Cyclin A-I 9個成員。細胞周期的紊亂將導致無限制的細胞分化，這是腫瘤發(fā)生的原因之一。實驗研究發(fā)現(xiàn)，在體外以脂質體作為載體將細胞周期素A （Cyclin A）反義核苷酸轉染入白血病細胞系HL-60細胞，HL-60細胞生長較對照組明顯降低，細胞出現(xiàn)明顯的凋亡特征。cyclin G1作為一種新的細胞周期素，在細胞的生長過程中起著一定作用。利用細胞周期素G1（cyclin G1）反義硫代脫氧寡核苷酸對HL-60細胞在裸鼠體內生長的抑制作用研究發(fā)現(xiàn)，cyclin G1蛋白的表達明顯下降，裸鼠體內HL-60細胞的生長受抑，且有部分細胞出現(xiàn)凋亡。

    近十幾年來，反義技術的迅速發(fā)展，已成為醫(yī)學界研究的熱點領域之一，許多反義藥物已進入臨床實驗，并取得了一定的療效，這為白血病以及其他惡性腫瘤的診治帶來了新的希望。但同時我們也應看到反義治療技術還處在起步階段，還存在不少問題，比如轉染效率不夠高，特異性及穩(wěn)定性還有待解決等。我們有理由相信，隨著科學技術的飛速發(fā)展，這些問題將被逐步解決，由于反義技術的獨特優(yōu)勢，它必將成為治療腫瘤的有力手段。