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    危險(xiǎn)，既可以指危及人身安全，即有毒物品，也可以指導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的因素。本文所說(shuō)的危險(xiǎn)，指的是第二種含義。

    很多因素都可以影響實(shí)驗(yàn)的成敗，一個(gè)小小的失誤，可能就會(huì)毀掉一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而有些因素，卻可能導(dǎo)致很多實(shí)驗(yàn)都失敗。這樣的因素，便是我所認(rèn)為的“實(shí)驗(yàn)室里最危險(xiǎn)的東西”.

    1. 空氣

    我們不是在真空里面做實(shí)驗(yàn)，即使大部分時(shí)候試劑是蓋上的，但是總有接觸空氣的時(shí)候。如果空氣質(zhì)量不好，例如灰塵含量過(guò)高，細(xì)菌、真菌含量太多，就非常容易污染試劑，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

    所以，最好定期檢測(cè)空氣的質(zhì)量。可以用不加氨芐西林的LB培養(yǎng)皿暴露于空氣中一小時(shí)，然后37度孵育一天，看有多少細(xì)菌克隆來(lái)檢測(cè)細(xì)菌含量（這個(gè)我沒(méi)做過(guò)），用加氨芐西林的LB培養(yǎng)皿暴露于空氣中一小時(shí)，室溫下避光孵育3天，看有多少真菌克隆來(lái)檢測(cè)真菌含量。如果細(xì)菌和真菌很多，一定要非常注意無(wú)菌技術(shù)。

    我曾經(jīng)用LB培養(yǎng)皿檢測(cè)過(guò)空氣中的真菌，結(jié)果見(jiàn)下圖。但是，專門用于培養(yǎng)真菌的Sabouraud Agar plate http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/3156-sabouraud-agar-for-fungal-growth-protocols 應(yīng)該效果更好。

    這是我在做大腸桿菌培養(yǎng)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有真菌污染之后做的空氣中真菌含量檢測(cè)。左側(cè)是放在試驗(yàn)臺(tái)上一個(gè)小時(shí)，右側(cè)是放在室外一個(gè)小時(shí)?？梢?jiàn)，室內(nèi)空氣中有真菌，但是比室外要少。

    為了保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的空氣質(zhì)量，應(yīng)該定期打掃實(shí)驗(yàn)室，因?yàn)榈匕?、?shí)驗(yàn)臺(tái)上的灰塵在走動(dòng)時(shí)會(huì)揚(yáng)起，角落里的垃圾可能是細(xì)菌和真菌的良好培養(yǎng)基。同時(shí)，一般來(lái)說(shuō)實(shí)驗(yàn)室外面的空氣中細(xì)菌真菌含量高于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，所以最好不要開(kāi)窗。

    2. 水

    幾乎所有的試劑都是在溶液中起反應(yīng)，所以做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，一定要保證水的質(zhì)量合格。如果水的質(zhì)量不達(dá)標(biāo)，實(shí)驗(yàn)失敗在所難免。我就在網(wǎng)上看到有人說(shuō)當(dāng)他們用Milli –Q water去清洗玻片的時(shí)候，組織從玻片上掉下來(lái)，而換用普通的水之后，問(wèn)題就消失了， 見(jiàn)http://www.ihcworld.com/smf/index.php?topic=2401.0 （當(dāng)然，這個(gè)不一定完全可靠，因?yàn)闆](méi)有做嚴(yán)格的對(duì)照和重復(fù)）。在《At the Bench》一書(shū)里，作者寫道：很多人都知道，有些實(shí)驗(yàn)僅僅是因?yàn)閾Q了一種配溶液的水就做不出來(lái)了。

    在我們這里，如果系統(tǒng)沒(méi)有問(wèn)題的話，Milli-Q 水可以滿足絕大部分實(shí)驗(yàn)的要求。對(duì)于用水純度要求高的實(shí)驗(yàn)，例如原位雜交，最好用公司購(gòu)買的配好的溶液。如果實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問(wèn)題懷疑是水的質(zhì)量所致，可以用公司購(gòu)買的水作為對(duì)照檢驗(yàn)其質(zhì)量。

    3.  Pipette（移液器）

    幾乎所有操作都要用到移液器，如果移液器污染，則可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。所以，要保持移液器清潔，移液的時(shí)候，要防止液體進(jìn)入移液器。有些實(shí)驗(yàn)例如RNA操作，最好用filter tip 以防止移液器里的RNase或者微生物進(jìn)入樣品。

    去除移液器表面的RNase的方法：我從網(wǎng)上看到的方法是用10%的bleach清洗。但是導(dǎo)師說(shuō)bleach會(huì)破壞移液器的塑料，所以他建議我先用普通的清潔劑清洗，然后用70%的酒精清洗。不知道有沒(méi)有更好的方法？

    4.  EP管和槍頭

    很多反應(yīng)是在EP管中進(jìn)行的，很多試劑分裝于EP管中，絕大部分的移液都要用到槍頭。如果EP管和槍頭被污染，自然會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響。我所用過(guò)的EP管和槍頭都沒(méi)有遇到過(guò)問(wèn)題，但是我記得曾經(jīng)看過(guò)一篇SCIENCE的報(bào)道說(shuō)一次性塑料實(shí)驗(yàn)用品會(huì)釋放出微量的物質(zhì)。作者在用單胺氧化酶B做試驗(yàn)的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)酶的活性被抑制，于是檢測(cè)了不同品牌的tube和tip,果然發(fā)現(xiàn)了能夠抑制該酶活性的物質(zhì)：di（2-hydroxyethyl）methyldodecylammonium,9-octadecenamide.他們檢測(cè)的品牌包括著名的Fisher Scientific（1）。

    絕大部分的EP管和槍頭都注明是“DNase and RNase Free”,但是，專門生產(chǎn)RNase抑制劑的Ambion公司卻說(shuō)不一樣是RNase free.所以，最近我在做原位雜交的實(shí)驗(yàn)時(shí)，就檢測(cè)了EP管的RNase.一管用***清洗，一管不清洗，然后加入RNA,37度孵育一小時(shí)，電泳，結(jié)果沒(méi)有區(qū)別。當(dāng)然，我孵育的時(shí)間不是很長(zhǎng)，樣本量不大，也沒(méi)有重復(fù)。

    一般來(lái)說(shuō)，EP管和槍頭不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)有太大的影響，尤其是來(lái)自于知名品牌的產(chǎn)品。如果是非知名品牌，或者需要做非常敏感的實(shí)驗(yàn)，還是有必要檢測(cè)的。

    5.  過(guò)期的試劑

    過(guò)期失效的試劑導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗是再正常不過(guò)的了。所以，一般情況下不要使用過(guò)期的試劑，尤其不能使用別人的留下的過(guò)期試劑（我曾經(jīng)有過(guò)血的教訓(xùn)）。有些試劑，例如抗體、酶，是容易變質(zhì)的，但是，一般情況下過(guò)了產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)所說(shuō)的保質(zhì)期還可以用。因?yàn)檫@些試劑比較貴，所以一般過(guò)了保質(zhì)期還會(huì)繼續(xù)使用。使用這樣的試劑，如果不清楚是否依然有效，就要設(shè)立對(duì)照來(lái)檢驗(yàn)。例如，對(duì)于限制性內(nèi)切酶，可以用已知不耐受酶切的質(zhì)粒+沒(méi)有問(wèn)題的buffer作為一個(gè)對(duì)照，檢驗(yàn)酶的活性。

    最安全的地方就是最危險(xiǎn)的地方，最不容易想到的導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的因素就是實(shí)驗(yàn)室里最危險(xiǎn)的東西。以上所說(shuō)的情況，一般都不會(huì)有問(wèn)題，但是如果實(shí)驗(yàn)失敗，檢測(cè)了很多因素還是找不到原因，可能就需要懷疑這幾個(gè)因素了。

    參考文獻(xiàn)：

    1.  G. R. McDonald et al., Science 322, 917 （Nov, 2008）。